人HE4測定試劑盒96T(酶聯(lián)免疫吸附法)
人HE4測定試劑盒96T(酶聯(lián)免疫吸附法)
人HE4測定試劑盒96T(酶聯(lián)免疫吸附法)
實驗原理
HE4 EIA是一種非競爭性的夾心酶聯(lián)免疫方法。它通過兩種小鼠單克隆抗體,即2H5和3D8,直接針對于HE4結(jié)構(gòu)域中C-WFDC的兩個抗原決定簇位點。操作時將標準品、質(zhì)控品及患者標本和生物素標記的抗HE4鼠單克隆抗體(MAb)2H5滴加至鏈霉親和素包被的微孔板中一起溫育。在溫育過程中,標準品或患者標本中存在的HE4抗原通過生物素標記的抗HE4單克隆抗體(MAb)吸附到鏈霉親和素包被的微孔板上。隨后清洗微孔
板,加入HRP標記的抗HE4單克隆抗體3D8進行溫育反應。經(jīng)過第二次清洗后,向每孔加入底物/顯色緩沖液(過氧化氫和3,3',5,5'四甲基聯(lián)苯胺)使其發(fā)生酶促反應。在酶促反應過程中如果抗原存在則會顯示為藍色。其顏色的深度與標本中HE4的含量呈正比。微板孔中顏色的深度可用酶標儀在620nm (也可選擇加入終止液后在405 nm )進行檢測。
每次試驗后均需根據(jù)每個標準品的濃度與其相對應的吸光度數(shù)值繪制標準曲線,患者標本中的HE4濃度即可從標準曲線上讀出。
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